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小鼠免疫實驗

山東朱氏藥業(yè)集團有限公司2022/10/24 7:30:20

實驗方法原理

實驗材料 任意品系小鼠（6～8 周）

試劑、試劑盒 PBS完全和不完全弗氏佐劑抗原

儀器、耗材 22－G 注射針頭帶塞的 3 ml 注射器雙頭帶塞的連接器無菌剪刀剃須刀片解剖刀片木制涂棒

實驗步驟

1. 準備等體積 PBS 含 25～100 μg 抗原和弗氏完全佐劑的乳化液（200～400 μl/鼠）。用雙頭帶塞的連接器連接兩個注射器，一個注射器裝抗原，另一個裝佐劑。來回推壓注射器，使得其內容物從一側到另一側注射器，推壓 5～10 min 直到得到穩(wěn)定的乳化液。

2. 用 22－G 的針給小鼠腹腔注射（每一個抗原 3～5 只小鼠）。

3. 3 周后，用等體積的含 10～50 μg 抗原的 PBS 和不完全弗氏佐劑配制成（200～400 μl）的乳化液再次腹腔注射。

4. 第二次免疫后 7 天，用無菌剪刀或剃毛刀片切掉小鼠尾巴 0.5 cm 采血。收集 100～200 μl 血裝于 1.5 ml 的微量離心管。將小鼠放在產(chǎn)熱燈下 30～60 s 保暖或用拇指和食指擠壓尾巴可以方便采血。

5. 血塊形成后，用木制涂棒把血塊從管和表面移走，不要弄破血塊。移走血塊后，用 200μl 的移液器把血清裝入另一微量離心管。經(jīng) ELISA 確定血清抗體滴度。如有需要，用免疫印跡，進一步對抗體定性。

6. 如果滴度太低不能用于融合（≥1/1000），每兩周給小鼠加強免疫直至達到足夠的應答。如果采血超過 3 次，用剃毛刀切開一側尾靜脈采血。

7. 當抗體滴度足夠高時（≥1/1000），融合前 3 天，但要在前一次免疫的 2 周后，用含 10～50 μg 抗原的 PBS 溶液腹腔注射（200～400μl）或經(jīng)皮下尾靜脈（50～100μl）注射加強免疫。

8. 在強化免疫的 3 天后進行細胞融合。




注意事項

處理弗氏佐劑要小心，因為自注射會產(chǎn)生陽性的 TB 試驗，導致肉芽腫樣反應。