如何判斷蛋白質(zhì)藥物與DNA是否結(jié)合
2012/7/21  閱讀數(shù)：

    據(jù)m.x4y7.cn小編了解，我們在判斷蛋白質(zhì)是否能夠與dna相互作用的時候，往往要用兩個試驗來進行驗證。這兩個試驗為凝膠阻滯試驗和dnasei足跡試驗。

    gel retardation assay ，即凝膠阻滯試驗，又稱為dna遷移率變化試驗。這是一項體外研究dna與蛋白質(zhì)相互作用的特殊的凝膠電泳技術。在凝膠電泳中，在電場作用下，小分子dna片段要比結(jié)合蛋白質(zhì)的dna片段向陽極移動的速度快。標記短雙鏈dna片段，與蛋白質(zhì)混合，對混合物進行凝膠電泳。如果目的dna與特異性蛋白質(zhì)結(jié)合，向陽極移動的速度受到阻滯，對其進行放射性自顯影，找到dna結(jié)合蛋白。

    dnasei足跡試驗是由于蛋白質(zhì)結(jié)合到ｄｎａ片段上，保護結(jié)合部位不被ｄｎａｓｅｉ破壞，蛋白質(zhì)從而在dna片段上留下足跡。在電泳凝膠上的放射性自顯影圖片，相應于蛋白質(zhì)結(jié)合的部位沒有放射性標記條帶，出現(xiàn)空白區(qū)域。這項技術主要用于檢測dna和蛋白質(zhì)相互作用以及其結(jié)合的位置。將待檢測的雙鏈dna分子用p32標記末端，用限制性內(nèi)切酶去掉其中一個末端，得到只有一條鏈的單個末端標記的雙鏈dna分子。將標記的dna與細胞蛋白質(zhì)混合，待其結(jié)合后添加少量dnasei消化dna分子，控制酶量使其平均每條鏈只發(fā)生一次磷酸二酯鍵斷裂。如果蛋白質(zhì)不與dna結(jié)合，那么消化后不會出現(xiàn)等距離放射性標記末端影像。如果有一種蛋白質(zhì)結(jié)合上去會保護該段dna分子，就無法產(chǎn)生相應的切割條帶。

 

編輯：山西:小張